支原体是最小和最简单的自我复制生命体。由于支原体体积小（100 nm），缺乏刚性的细胞壁，因此肉眼无

法检测到支原体，它们可以透过一般过滤膜，并对很多抗生素都具有抵抗力。支原体污染是细胞培养中的一

个主要问题，不止影响实验结果的有效性，更会影响细胞工程制药的质量和安全性。

支原体的特征

支原体属于柔膜菌纲，其成员特征为缺乏细胞壁以及拥有多变的形态。支原体对包括原代细胞在内的所有真核细胞类型具有高度传染性。成百上千的支原体可以附着在一个细胞上，与细胞膜融合、繁殖，最终数量可以超过培养细胞1000倍。支原体可以彻底改变细胞特性和扭曲研究结果。而支原体脂蛋白可被Toll样受体2（TLR2）识别并激活免疫细胞3。支原体没有细胞壁的特点使它们对常用的抗生素（如青霉素和链霉素）产生抗性。此外，它们的尺寸微小（~100nm），能够穿透过0.2μm的标准过滤膜。因此，我们需要采取预防措施来防止细胞培养物受到污染。

支原体污染对细胞功能的主要影响

支原体与宿主细胞竞争营养素和代谢物前体。因此，它们能改变许多细胞功能，影响到细胞代谢和细胞生长，最终导致细胞死亡。通过对受污染的人源细胞进行微阵列分析，科学家发现支原体严重影响数百个基因的表达，当中包括受体、离子通道、生长因子和致癌基因4。一旦与宿主细胞膜粘附或融合，支原体可以通过干扰信号级联和细胞因子产生，进一步损害细胞5。这些有害效应会强烈干扰实验数据，导致研究结果无

效，特别是当涉及表达TLR2的免疫细胞时，如巨噬细胞。

支原体污染的检测

InvivoGen提供两种支原体检测方法，令您能够及时抵御细胞污染。两种试剂均可快速和准确地检测出最常污染细胞培养的支原体物种。

MycoStrip™是一种能够“即时”（〜1小时）检测支原体基因组的免疫层析试纸，而PlasmoTest™是基于检测支原体脂蛋白的比色细胞分析法。

基因检测试纸条

MycoStrip™

• 适合用于即时测试

• 简单：无需特殊设备

• 快速：实际操作时间<15分钟，总时长约1小时

• 清晰：一条条带 - 支原体阴性

两条条带 - 支原体阳性

MycoStrip™基于等温PCR的技术，在加入我们专有的反应混合物后，靶向扩增细胞培养中，最常见（占95％）支原体物种的16S rRNA基因。在5分钟内免疫层析试纸条的显示区上就会出现检测结果的条带。

细胞比色分析法

PlasmoTest™

• 适合常规测试使用

• 简单：使用细胞培养上清液进行比色检测

• 快速：操作时间<1小时。过夜培养后可见结果

• 灵敏：培养上清液中检测限为 5.10（2次方） - 5.10（5次方） CFU/ml

InvivoGen拥有**的HEK-Blue™-2细胞，稳定表达人源TLR2（支原体脂蛋白的主要识别受体1

）,以及一个NF-κB诱导的分泌型胚胎碱性磷酸酶（SEAP）报告基因。HEK-Blue™-2细胞可直接在HEK-Blue™检测培养基中培养，便于检测，是常规检测的理想选择。简单向这些细胞添加测试样品则可以得到比色结果，其灵敏度与基于生物化学发光的分析法相近。培养上清液样品中SEAP报告基因的活性可使用分光光度计在620-655nm下测量。而吸光度与污染物的量成正比。为了您的方便，HEK-Blue™-2细胞会附送Normocin™。Normocin™是一种抗生素混合物，能够防止细胞培养受到支原体、细菌和真菌的污染。

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