影响抗原-抗体结合反应的因素
影响抗原-抗体反应的因素很多,主要包括其自身的性质和外界实验条件。
1抗原抗体的性质
抗原-抗体反应的整体强度受3个因素控制:抗体对表位的内在亲和力,抗原抗体的结合价以及参与反应成分的立体结构。其中亲和性和特异性是反应的关键因素。
2电解质
抗原抗体发生特异性结合后,由由亲水性胶体变为疏水性胶体,电解质的存在会使抗原-抗体复合物失去电荷而沉淀或凝集,出现可见反应。常用0.85%的氯化钠或各种缓冲溶液作为抗原抗体的稀释液,用来中和胶体粒子上的电荷,促使抗原-抗体复合物从溶液中析出,形成可见的沉淀物或凝聚物。
3酸碱性
蛋白质具有两性电离的性质,抗原抗体的反应必须在合适的PH环境中进行。一般为pH=6.0~8.0,超出此范围会影响抗原抗体的理化性质,出现假阴性反应。
4温度
在一定的范围内适当的温度会增加抗原抗体分子的运动,增加分子碰撞的机会,使反应速度加快。一般抗原抗体的温度为37℃,温度高于50℃,会使结合的抗原抗体解离、变性;温度太低,反应速度变慢。但某些抗原-抗体反应有其独特的最适合温度,如冷凝集素在4℃左右与红细胞结合最好,20℃以上反而解离。此外适当震荡或搅拌也可促使抗原抗体分子的接触,加速反应的进行。